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无公害食品 猪肉
发布日期: 2001-09-03  实施日期: 2001-10-01  有效状况: 已实施  发布部门: 农业部  代号: NY5029-2001
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无公害食品 猪肉
发布时间: 2003-11-19 信息来源: 
1 范围

本标准规定了无公害猪肉的定义、技术要求、检验方法、标志、包装、贮存和运输。

本标准适用于来自非疫区的无公害生猪,屠宰后经兽医检疫合格的猪肉。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其后其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。

GB 191 包装储运图示标志

GB 2707 猪肉卫生标准

GB 4789.2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定

GB 4789.3 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定

GB 4789.4 食品卫生微生物学检验 沙门氏菌测定

GB 4789.17 食品卫生微生物学检验 肉与肉制品检验

GB/T 5009.11 食品中总砷的测定方法

GB/T 5009.12 食品中铅的测定方法

GB/T 5009.15 食品中镉的测定方法

GB/T 5009.17 食品中总汞的测定方法

GB/T 5009.19 食品中六六六、滴滴涕残留量的测定方法

GB/T 5009.44 肉与肉制品卫生标准的分析方法

GB/T 6388 运输包装收发货标志

GB 7718 食品标签通用标准

GB 12694 肉类加工厂卫生规范

GB/T 14962 食品中铬的测定方法

GB/T 17236 生猪屠宰操作规程

GB/T 17996 生猪屠宰产品品质检验规程

NY 467 畜禽屠宰卫生检疫规范

NY/T 468 动物组织中盐酸克伦特罗的测定 气相色谱-质谱法

NY/T 5033 无公害食品 生猪饲养管理准则

3 技术要求

3.1 原料

活猪必须来自按NY/T 5033 规定组织生产的养猪厂,并经当地动物防疫监督机构检验合格。

3.2 屠宰加工

生猪屠宰按GB/T 17236 和NY 467 规定进行,屠宰加工过程中的卫生要求按GB 12694 执行。

3.3 感官指标

感官指标应符合GB 2707 的规定。

3.4 理化指标

表1 无公害猪肉理化指标

  项 目          指 标 
解冻失水率,%       ≤8
挥发性盐基氮,mg/100g    ≤15
汞(以Hg计),mg/kg     ≤按GB2707 
铅(以Pb计),mg/kg     ≤0.50 
砷(以As计),mg/kg     ≤0.50
镉(以Cd计),mg/kg     ≤0.10 
铬(以Cr计),mg/kg     ≤1.0 
六六六,mg/kg        ≤0.10 
滴滴涕,mg/kg        ≤0.10
金霉素,mg/kg        ≤0.10
土霉素,mg/kg        ≤0.10
氯霉素           不得检出 
磺胺类(以磺胺类总量计),mg/kg≤0.10 
伊维菌素(脂肪中),mg/kg  ≤0.02
盐酸克伦特罗        不得检出 

3.5 微生物指标

微生物指标应符合表2 规定

表2 无公害猪肉微生物指标

  项 目             指 标 
菌落总数,cfu/g          ≤1×106 
大肠菌群,MPN/100g         ≤1×104 
沙门氏菌              不得检出

4 检验方法

4.1 感官检验

按GB/T 5009.44规定方法检验。

4.2 理化检验

按附录A规定方法测定。

4.2.1 解冻失水率

按附录A规定方法测定。

4.2.2 挥发性盐基氮

按GB/T 5009.44 规定方法测定。

4.2.3 汞

按GB/T 5009.17 规定方法测定。

4.2.4 铅

按GB/T 5009.12 规定方法测定。

4.2.5 砷

按GB/T 5009.11 规定方法测定。

4.2.6 镉

按GB/T 5009.15 规定方法测定。

4.2.7 铬

按GB/T 14962 规定方法测定。

4.2.8 六六六、滴滴涕

按GB/T 5009.19 规定方法测定。

4.2.9 金霉素

按附录B规定方示测定。

4.2.10 土霉素

按附录C规定方法测定。

4.2.11 氯霉素

按附录D规定方法测定。

4.2.12 磺胺类

按附录E规定方法测定。

4.2.13 伊维菌素

按附录F规定方法测定。

4.2.14 盐酸克伦特罗

按NY/T 468规定方法测定。

4.3 微生物检验

4.3.1 菌落总数

按GB 4789.2 检验。

4.3.2 大肠菌群

按GB 4789.3 检验。

4.3.3 沙门氏菌

按GB 4789.4检验。

5 标志、包装、贮存、运输

5.1 标志:内包装(销售包装)标志应符合GB 7718 的规定执行,外包装的标志应按GB 191和GB/T 6388 的规定执行。

5.2 包装:包装材料符合相应的国家食品卫生标准。 5.3 贮存:产品应贮存在通风良好的场所,不得与有毒、有害、有异味、易挥发、易腐蚀的物品同处贮存。

5.4 运输:应使用符合食品卫生要求的专用冷藏车(船),不得与有对产品发生不良影响的物品混装。

附 录A

(规范性附录)

解冻失水率的测定

A.1 仪器和工具

电子秤:感量1g;

温度计:-10℃-50℃,分度值1.5℃。

A.2 抽样

从每批产品中随机抽取3-7件。样品在运输过程中应使用保温设备,以免解冻流失水份。

A.3 测定步骤

将铁丝网置于搪瓷盘内,并使铁丝网与搪瓷盘底部的距离大于2cm。从抽取的样品中切取的1000g-1200g,用电子秤称量后置于铁丝网上。在样品上覆盖塑料膜,使样品在15℃-25℃自然解冻。待样品中心温度达到2℃-3℃时,用电子秤称量。再将样品置于铁丝网上放置30min,称量,重复放置30min再称量,直至连续两次称量差不超过20g。

A.4 测定结果的表述

样品解冻失水率按式(A.1)计算:

X(%)=m-m1/m×100……………………(A.1)

式中:

X-样品解冻失水率,单位为百分率(%);

m-样品解冻前的质量,单位为克(g);

m1-样品解冻后的质量,单位为克(g)。

计算结果保留至整数。 A.5 允许差

同一样的两次测定值之差,不得超过平均值的5%。

附 录 B

(规范性附录)

金霉素残留的高效液相色谱测定法

B.1 适用范围

本方法用于测定鸡和猪的肌肉、肝脏、肾脏和脂肪组织中金霉素的残留量。

B.2 原理

组织中金霉素经MCI-Vaine-Na2EDTA缓冲液(PH4.0)提取,过滤后,通过C18微柱水洗,用草酸甲醇将药物洗脱,洗脱液用高效液相色谱仪进行测定。

B.3 可靠的检测限

本方法在肌肉、肝脏、脂肪和肾脏组织中的检测限为0.05μg/g。

B.4 仪器

B.4.1 高效液相色谱仪,配紫外检测器。

B.4.2 匀浆机。

B.4.3 离心机。

B.4.4 旋涡混合器。

B.4.5 自动电位滴定计。

B.4.6 磁力加热搅拌器。

B.4.7 C18微柱。

B.4.8 布氏漏斗。

B.4.9 球形漏斗。

B.4.10 滤膜:0.45μm。

B.4.11 抽滤瓶。

B.5 药品和试剂

B.5.1 盐酸金霉素标准品:纯度≥84%。

B.5.2 乙腈:色谱纯。

B.5.3 甲醇:分析纯。

B.5.4 乙酸铵:分析纯。

B.5.5 柠檬酸:分析纯。

B.5.6 依地酸二钠:分析纯。

B.5.7 磷酸氢二钠:分析纯。

B.5.8 草酸:分析纯。

B.5.9 三氟乙酸:分析纯。

B.5.10 N,N-二甲基甲酰胺:分析纯。 B.5.11 草酸铵:分析纯。

B.5.12 磷酸氢二铵:分析纯。

B.6 溶液

B.6.1 金霉素标准液:准确称取适量盐酸金霉素,用甲醇溶解,使成浓度为100μg/mL的标准储备液,置冰箱保存。临用前,取此储备液,用甲醇依次衡释成浓度为5.0、2.0、1.0、0.5、0.25、0.1、0.05μg/mL的标准工作液。

B.6.2 MCI-Vaine缓冲液:准确称取Na2HPO428.41g,用水溶解,定容于1000mL容量瓶中,简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g,用水溶解,定容于1000mL容量瓶中,简称溶称液B。取625mL溶液A和1000mL溶解B混匀,调节pH至4.0±0.05。

B.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液:准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI-Vaine液中,使成0.01mol/L Na2EDTA的MCI-Vaine液。

B.6.4 0.01mol/L草酸甲醇溶液:准确称取草酸1.26g,用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。

B.6.5 0.01mol/L草酸溶液:准确称取草酸1.26g,用水溶解并定容于1000mL容量瓶中。

B.7 分析

B.7.1 提取和纯化

B.7.1.1 称取5.00g组织匀浆放入50mL聚丙烯离心管中,添加TCS药物,使成相应的浓度。

B.7.1.2 加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液,盖上帽,漩涡半分钟,手摇5min。

B.7.1.3 4500r/min的速度离心10min,上清液倒入另一离心管,再加入20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中,漩涡分半分钟,手摇5min。

B.7.1.4 4500r/min的速度离心5min,上清液倒入上个试管中,再加入10mL MCI-Vaine-Na2EDTA 液于沉淀中,漩涡半分钟,手摇5min。

B.7.1.5 4500r/min 的速度离心5min,混合全部上清液(共50mL),4500r/min的速度离心10min。

B.7.1.6 用MCI-Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸,用较小真空(水泵)过滤上清液,2×2mL MCI-Vaine-Na2EDTA液洗抽滤瓶在放入注射器中。

B.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇,20mL水冲洗,之后将过滤的液体倒入50mL注射器中,用2×2mL MCI-Vaine-Na2EDTA 液洗抽滤瓶并放入注射器中。

B.7.1.8 过C18微柱,使TCS药物吸附在C18微柱上。

B.7.1.9 用20mL 水冲洗抽滤瓶倒入注射器中,并过滤,水洗C18微柱。

B.7.1.10 用水冲洗完全后,顶空5min。

B.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中,用水定容至刻度。

B.7.1.12 上述液用滤膜过滤后,上高效液相色谱仪进行检测。

B.7.2 测定条件

B.7.2.1 色谱柱:C18柱。

B.7.2.2 流动相:甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸(1.5+1.5+2.0,pH=2.0)。

B.7.2.3 流速:1.5mL/min。

B.7.2.4 检测波长:350nm.

B.7.2.5 进样量:10μL。

B.7.3 样品测定

分析样品按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析。

B.7.4 计算

用色谱数据处理机或按式(B.1)计算试样中金霉素残留量:

W=H?CS/HS?C………………………………(B.1)

式中:

W-试样中金霉素残留量,单位为微克每克(μg/g);

H-试样液中金霉素的峰高,单位为毫米(mm);

Hs-标准工作液中金霉素的峰高,单位为毫米(mm);

CS-标准工作液中金霉素的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

C-最终试样液所代表的试样的浓度,单位为克每毫升(g/mL)。

注:计算结果需扣除空白值。

附 录 C

(规范性附录)

土霉素残留的高效液相色谱测定法

C.1 适用范围

本方法用于测定动物可食性组织中土霉素的残留素。

C.2 原理

组织经MCI-Vaine-Na2EDTA缓冲液(pH4.0)提取,过滤后,通过C18微柱水洗后,用草酸甲醇将药物洗 脱,洗脱液用高效液相色谱仪进行检测。

C.3 可靠的检测限

本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05μg/g。

C.4 仪器。

C.4.1 高效液相色谱仪,配紫外检测器。

C.4.2 匀浆机。

C.4.3 离心机。

C.4.4 漩涡混合器。

C.4.5 自动电位滴定计。

C.4.6 磁力加热搅拌器。

C.4.7 C18微柱。

C.4.8 布氏漏斗。

C.4.9 球形漏斗。

C.4.10 滤膜:0.45μm。

C.4.11 抽滤瓶。

C.5 药品和试剂

C.5.1 盐酸土霉素标准品:纯度≥90%。

C.5.2 乙腈:色谱纯。

C.5.3 甲醇:分析纯。

C.5.4 乙酸铵:分析纯。

C.5.5 柠檬酸:分析纯。

C.5.6 依地酸二钠:分析纯。

C.5.7 磷酸氢二钠:分析纯。

C.5.8 草酸:分析纯。

C.5.9 三氟乙酸:分析纯。

C.5.10 N,N-二甲基甲酰胺:分析纯。

C.5.11 草酸铵:分析纯。

C.5.12 磷酸氢二铵:分析纯。

C.6 溶液

C.6.1 土霉素标准液:准确称取适量盐酸土霉素标准品,用甲醇配成浓度为100μg/mL的标准储备液,置冰箱中保存。临用前,取此储备液,用甲醇依次稀释成浓度为5.0、0.2、1.0、0.5、0、25、0.1、0.05μg/mL的标准工作液。

C.6.2 MCI-Vaine缓冲液:准确称取Na2HPO428.41g,用水溶解,定容于1000mL,容量瓶中,简称溶液A。准确称取柠檬酸21.00g,用水溶解,定容于1000mL容量瓶中,简称溶液B。取625mL溶液A和1000mL溶液B混匀,调节pH至4.0±0.05。

C.6.3 MCI-Vaine-Na2EDTA液:准确称取Na2EDTA60.49g溶解于1625mL的MCI-Vaine液中,使成含0.01mol/L Va2EDTA的MCI-Vaine液。

C.6.4 0.01mol/L草酸甲醇:准确称取草酸1.26g,甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中。

C.6.5 0.01mol/L草酸溶液:准确称取草酸1.26g,水溶解并定容于1000mL容量瓶中。

C.7 分析

C.7.1 提取和纯化

C.7.1.1 称取5.00g组织匀浆(精确到0.1g)放入50mL聚丙烯离心管中,添加TCS药物,使成相应的浓度。

C.7.1.2 加20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液,盖上帽,漩涡半分钟,手摇5min。

C.7.1.3 以4500r/min的速度离心10min,上清液倒入另一离心管,再加20mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中,漩涡半分钟,手摇5min。

C.7.1.4 以4500r/min的速度离心5min,上清液倒入另一离心管,再加10mL MCI-Vaine-Na2EDTA液于沉淀中,漩涡半分钟,手摇5min。

C.7.1.5 以4500r/min的速度离心5min,混合全部上清液(共50mL),以4500r/min的速度离心10min。

C.7.1.6 用MCI-Vaine-Na2EDTA液湿润抽滤瓶、布氏漏斗及滤纸,用较小真空(水泵)过滤上清液,2×2ml MCI-Vaine-Na2EDTA液洗抽滤瓶并过滤。

C.7.1.7 C18微柱先依次用20mL甲醇,20mL水冲洗,之后将过滤的液体倒入50mL注射器中,用2×2ml MCI-Vaine-Va2EDTA液洗抽滤瓶并放入注射器中。

C.7.1.8 C18微柱,使TCS药物吸附在C18微柱上。

C.7.1.9 用20mL 水冲洗抽滤瓶倒入注射器中,并过滤,水洗C18微柱。

C.7.1.10 用水冲洗完全后,顶空5min。

C.7.1.11 用6.0mL 0.01mol/L草酸甲醇液把TCS药物从C18微柱中洗脱于10mL容量瓶中,用水定容至刻度。

C.7.1.12 上述液用滤膜过滤后,供高效液相色谱仪进行检测。

C.7.2 测定条件

C.7.2.1 色谱柱:C18柱。

C.7.2.2 流动相:甲醇-乙腈-0.01mol/L草酸(1.5+1.5+2.5)。

C.7.2.3 流速:1.5mL/min。

C.7.2.4 检测波长:350nm。

C.7.2.5 进样量:10μL。

C.7.3 样品测定

分析样品按上述仪器作条件供高效液相色谱仪分析。

C.7.4 计算

用色谱数据处理机或按式(C.1)计算试样中土霉素残留量:


W=H?CS/HS?C………………………………(C.1)

式中:

W-试样中土霉素残留量,单位为微克每克(μg/g);

H-试样液中土霉素的峰高,单位为毫米(mm);

Hs-标准工作液中土霉素的峰高,单位为毫米(mm);

CS-标准工作液中土霉素的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

C-最终试样液所代表的试样的浓度,单位为克每毫升(g/mL)。

注:计算结果需扣除空白值。


附 录 D

(规范性附录)

氯霉素残留的气相色谱测定法

D.1 适用范围

本方法用于测定肉牛的肌肉组织中氯霉素的残留量。

D.2 原理

组织经β-葡萄糖醛酸酶消化,经乙酸乙酯提取,然后将乙酸乙酯浓缩。加4%氯化钠溶液,剩余的乙酸乙酯用氮气吹干。将盐溶液过C18萃取小柱,用20%甲醇洗涤,用甲醇洗脱。将洗脱液蒸发至干并固化,用配有电子捕获检测器的气相色谱仪测定氯霉素。异氯霉素做内标物定量。

D.3 可靠的检测限

本方法在牛肌肉组织的检测限为1.0ng/g。

D.4 仪器

D.4.1 气相色谱仪,配电子捕获检测器(63Ni)。

D.4.2 电子天平:感量0.00001g。

D.4.3 匀浆机。

D.4.4 离心机。

D.4.5 旋转蒸发仪。

D.4.6 振荡器。

D.4.7 电热恒温水浴锅。

D.4.8 固相萃取柱:C18柱。

D.5 药品与试剂

D.5.1 氯霉素标准品:纯度≥99%。

D.5.2 异氯霉素标准品:内标物。

D.5.3 β-葡萄糖醛酸酶-IX:生化试剂。

D.5.4 甲醇:分析纯。

D.5.5 乙酸乙酯:分析纯。

D.5.6 正已烷:分析纯。

D.5.7 三氯甲烷:分析纯。

D.5.8 乙腈:色谱纯。

D.5.9 环已烷:分析纯。

D.5.10 氯化钠:分析纯。

D.6 溶液

D.6.1 氯霉素标准液:准确称取氯霉素50mg,用甲醇溶解,使成浓度为500μg/mL的标准储备液,置4℃冰箱中保存。临用前,取此储备液,用甲醇稀释成浓度为100μg/mL的标准工作液。

D.6.2 异氯霉素标准液:准确称取异氯霉素50mg,用甲醇溶解,使成浓度为500μg/mL的标准储备液,置4℃冰箱中保存。临用前,取此储备液,用甲醇稀释成浓度为100μg/mL的内标液。

D.6.3 0.1mol/L KH2PO4和Na2HPO4的缓冲液(pH6.8±0.1):用相应的干试剂调节pH为6.8。

D.6.4 β-葡萄糖醛酸酶-IX:用缓冲液稀释至4000单位/mL。

D.6.5 Sylon HTP溶液:六甲基二硅烷(HMDS)3份,氯化三甲基硅烷1份,吡啶9份。

D.7 分析

D.7.1 提取和纯化

D.7.1.1 将组织解冻,称取肌肉组织10g(精确到0.1g),置于50mL玻璃离心管中。向每个样品中加100μL异氯霉素内标液(100μg/mL)。

D.7.1.2 每个分析样品配制1个空白、3个添加样品。向空白组织中加内标。回收率样品中加工作液,制成0.5mL/L(50μL工作液),1.0mL/L(100μL工作液),2.0mL/L(200μL工作液)的样品。由添加样品得到的数据用于计算。

D.7.1.3 向所有空白、添加对照和样品管中加15mL磷酸盐缓冲液(pH6.8±0.1)和200μL-β-葡萄糖醛酸酶(800单位),在室温条件下混合30s-60s。

D.7.1.4 将所有管置于37℃保温90min。保温后,样品可以放在冰箱中过夜。

D.7.1.5 样品放回室温平衡。向各管加乙酸乙酯15mL,旋涡混合30s提取氯霉素。

D.7.1.6 2000r/min的速度离心2min。

D.7.1.7 用一次性滴管吸取乙酸乙酯液(上层)留用并转移到另一干净的50mL离心管中。

D.7.1.8 重复(步骤D.7.1.5-D.7.1.7)提取样品,并合并提取液。

D.7.1.9 在氮气流下,用温度约60℃的沙浴去除乙酸乙酯使体积约为1mL。

D.7.1.10 向各管加4%氯化钠溶液4mL,混合5s-10s。

D.7.1.11 继续蒸发去除乙酸乙酯至乙酸乙酯层干,剩下小量的油性残留物。

D.7.1.12 向4%氯化钠溶液层加正已烷4mL,混合10s。2000r/min的速度离心1min,弃掉上层。

D.7.1.13 重复步骤D.7.1.12。

注意:以下步骤D.7.1.14至步骤D.7.1.17必须立即连续做完。切莫让吸附剂变干。

D.7.1.14 给每个样品、空白和添加对照准备一根C18柱,顺序用5mL甲醇、5mL三氯甲烷、5mL甲醇和10mL水洗涤C18柱。弃掉洗涤液。

D.7.1.15 用一次性巴氏吸管吸取全部水相溶液装入C18柱过柱,弃掉流出液。

D.7.1.16 用1mL水混合淋洗样品管2遍,并将淋洗液加入C18柱过柱,弃掉流出液。

D.7.1.17 用1mL水,然后2mL甲醇-水(2+8)洗涤C18柱。让最后一次洗涤液完全流出C18柱。弃掉洗液。

D.7.1.18 用乙腈将C18柱中的氯霉素洗脱,洗脱2次,每次1.5mL,合并洗脱液到一干净的10mL培养管中。

D.7.1.19 在氮气流下,用温度约60℃的沙浴蒸发去除乙腈至约为0.5mL。

D.7.1.20 转移至1mL锥形瓶中。用0.5mL乙腈洗涤10mL培养管,旋涡混合5s,并将洗涤液加到1mL锥形瓶中。在60℃用氮气流吹干。

注意:从这儿开始要防潮。

D.7.1.21 向干的残留物中加200μL Sylon HTP。

D.7.1.22 盖塞并旋涡混合5s。在60℃-70℃沙浴中反应15min。

D.7.1.23 在60℃用氮气流吹干去除多余的试剂蒸发至10μL。

注意:此步过长的吹干时间可导致丢失分析物。 D.7.1.24 将残留物重新溶于100μL环已烷-正已烷(6+4)中,旋涡混合5s。

D.7.1.25 注入适量微升体积的衍生物到气相色谱仪作定量测定。

D.7.2 测定条件

D.7.2.1 色谱柱:DB-1,30m×0.254mm i.d.。

D.7.2.2 载气:氦气,线性速度29cm/s。

D.7.2.3 初始柱温:80℃,维持1min。

D.7.2.4 温度程序:设定30℃/min升至260℃,维持10min或直到对位异构体和氯霉素已经流出。然后设定30℃/min升至300℃,维持5min以确保所有的样品已经流出。

D.7.2.5 进样室温度:280℃。

D.7.2.6 检测器温度350℃。

D.7.2.7 预期保留时间:氯霉素10min-11min,异氯霉素9.5min-10.5min。

D.7.2.8 预期响应值:对0.2ng氯霉素可以达到50%全刻度。

D.7.2.9 进样量:适量。

D.7.3 样品测定

分别注入适量标准工作溶液及适当浓度的样品溶液于气相色谱仪中,按上述色谱条件进行色谱分析。响应值均应在仪器检测的线性范围之内。

D.7.4 计算

用色谱数据处理机或按式(D.1)计算试样中氯霉素残留量:


W=H?CS/HS?C………………………………(D.1)

式中:

W-试样中氯霉素残留量,单位为微克每克(μg/g);

H-试样液中氯霉素的峰高,单位为毫米(mm);

Hs-标准工作液中氯霉素的峰高,单位为毫米(mm);

CS-标准工作液中氯霉素的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

C-最终试样液所代表的试样的浓度,单位为克每毫升(g/mL)。

注:计算结果需扣除空白值。

附 录 E

(规范性附录)

磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法

E.1 适用范围

本方法用于测定动物可食性组织中磺胺间甲氧嘧啶(SMM)、磺胺二甲基嘧啶(SM2)、磺胺甲恶唑(SMZ)、磺胺二甲氧嘧啶(SDM)、磺胺喹恶琳(SQ)单个或混合物的残留量。

E.2 原理

组织经乙腈提取后,其上清液再加入正已烷,向离心后的下层溶液加入正丙醇,减压干燥后的残留物用乙腈溶解,过Sep-Pak氧化铝B柱,洗脱液再用正丙醇处理,减压干燥后的残留物经流动相溶解后,所制样液用高效液相色谱仪进行检测。

E.3 可靠的检测限

本方法在动物可食性组织中的检测限为0.05μg/g。

E.4 仪器

E.4.1 高效液相色谱仪,配紫外检测器。

E.4.2 匀浆机。

E.4.3 旋转蒸发仪。

E.4.4 磁力搅拌器。

E.4.5 电子天平:感量0.00001g。

E.4.6 离心机。

E.4.7 振荡器。

E.4.8 抽滤器。

E.4.9 离心管。

E.5 药品和试剂

E.5.1 SMM,SM2,SMZ,SDM,SQ标准:纯度≥99%。

E.5.2 乙腈:色谱纯。

E.5.3 甲醇:分析纯,经重蒸馏。

E.5.4 乙酸:分析纯。

E.5.5 正已烷:分析纯,经重蒸馏。

E.5.6 正丙醇:分析纯,经重蒸馏。

E.5.7 无水硫酸钠:分析纯。

E.6 溶液

磺胺类药物标准液:准确称取适量各个磺胺药,用甲醇溶解,配制成适当浓度的标准储备液。临用前,取此储备液,用流动相稀释成浓度为0.1μg/mL-20μg/mL的标准工作液。

E.7 分析

E.7.1 Sep-Pak氧化铝B柱的制备

称取高温下加热3h的氧化铝粉,加水搅拌均匀,振荡3h后填充入玻璃柱中,用95%乙腈5mL前处理后备用。

E.7.2 提取和纯化

称取组织样品5g(精确到0.1g),加入乙腈25mL,无水硫酸钠少许(血清除外),匀浆后以3000r/min的速度离心5min。分离后的残渣再用25mL乙腈处理,振荡10min后,以3000r/min的速度离心5min。合并两次的上清液,加入正已烷30mL,振荡10min后,以3000r/min的速度离心5min,取下层液体,加入正丙醇10mL,50℃下减压干燥,残留物用95%乙腈3mL溶解,过Sep-Pak氧化铝B柱。用95%乙腈5 mL过柱,不收集,再用70%乙腈10mL洗脱后,洗脱液中加入5mL正丙醇,50℃下减压干燥后,残留物用2.0mL流动相溶解,所制样液用高效液相色谱仪进行检测。 E.7.3 检测条件

E.7.3.1 色谱柱:C18柱,250mm×4.6mm i.d.。

E.7.3.2 流动相:乙腈-甲醇-水-乙酸(2+2+9+0.2)。

E.7.3.3 流动相流速:1.0ml/min。

E.7.3.4 检测波长:270nm。

E.7.3.5 进样量:20μL。

E.7.4 样品测定

分别将等体积标准液和试样溶液注入液相色谱仪,标准工作液及试样中磺胺类药物的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样液测定过程中要参插注入标准工作液,以便准确定量。

E.7.5 计算

用色谱数据处理机或按式(E.1)计算试样中磺胺类药物残留量:


W=H?CS/HS?C………………………………(E.1)

式中:

W-试样中磺胺类药物残留量,单位为微克每克(μg/g);

H-试样液中磺胺类药物峰高,单位为毫米(mm);

Hs-标准工作液中磺胺类药物峰高,单位为毫米(mm);

CS-标准工作液中磺胺类药物浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

C-最终试样液所代表的试样的浓度,单位为克每毫升(g/mL)。

注:计算结果需扣除空白值。


附 录 F

(规范性附录)

伊维菌素残留的高效液相色谱测定法

F.1 适用范围

本方法用于测定牛、羊、猪肝脏、肌肉和脂肪组织中伊维菌素的残留量。

F.2 原理

组织中伊维菌素经已腈提取后用C18固相萃取柱净化,在三氟乙酸酐和N-甲基咪唑存在下,脱水生成荧光化合物,用高效液相色谱仪进行测定。

F.3 可靠的检测限

本方法在动物可食性组织中的检测限为2ng/g。

F.4 仪器

F.4.1 高效液相色谱仪,配荧光检测器。

F.4.2 匀浆机。

F.4.3 离心机。

F.4.4 旋转蒸发仪或氮气吹蒸装置。

F.4.5 旋涡混合器。

F.4.6 SPE柱(C18柱,6mL)。

F.5 药品和试剂

F.5.1 伊维菌素标准品:纯度≥90%。

F.5.2 乙腈:色谱纯。

F.5.3 甲醇:色谱纯。

F.5.4 N-甲基咪唑:纯度≥99%。

F.5.5 三氟乙酸酐:纯度≥99%。

F.6 溶液

F.6.1 伊维菌素标准液:准确称取适量伊维菌素标准品,用甲醇溶解,使成浓度为100μg/mL的标准储备液,置-20℃冰箱中保存,可保存一年。临用前,取此储备液,用甲醇稀释成适当浓度的标准工作液。

F.6.2 水-乙腈溶液(9+1)。

F.6.3 三氟乙酸酐-乙腈溶液(1+2)。

F.6.4 N-甲基咪唑-乙腈溶液(1+1)。

F.7 分析

F.7.1 提取和纯化

称取4.0g组织(精确到0.1g),加入40mL乙腈,高速匀浆2min,将样品转至离心管中,以20000 r/min的速度离心10min,沉淀物用乙腈(20mL×2)重复提取2次,离心后会并提取液,用旋转蒸发仪(60℃)将提取液浓缩蒸去乙腈,向残留物中添加10mL水,摇匀。

C18预柱依次用4mL乙腈和4mL水-乙腈溶液平衡,使样品液通过C18柱(1mL/min),吹去柱内残留的液体,用5mL乙腈洗脱柱内吸附的伊维菌素,用旋转蒸发仪蒸去溶剂。向残留物中依次加入150μL三氟乙酸酐-乙腈溶液和100μL N-甲基咪唑-乙腈溶液,经经摇匀后密闭、避光存放,30s后即可供高效液相色谱仪测定。

F.7.2 测定条件

F.7.2.1 色谱柱:C18柱,150mm×4.6mm i.d.,粒度5μm。

F.7.2.2 流动相:甲醇-水(95+5)。

F.7.2.3 流动相流速:1.5mL/min。

F.7.2.4 荧光检测:激发波长364nm,发射波长470nm。

F.7.2.5 进样量:10μL。

F.7.3 样品测定

将分析样品按上述操作条件供高效液相色谱仪分析。

F.7.4 计算

用色谱数据处理机或按式(F.1)计算试样中伊维菌素物残留量:


W=H?CS/HS?C………………………………(F.1)

式中:

W-试样中伊维菌素残留量,单位为微克每克(μg/g);

H-试样液中伊维菌素峰高,单位为毫米(mm);

Hs-标准工作液中伊维菌素峰高,单位为毫米(mm);

CS-标准工作液中伊维菌素浓度,单位为微克每毫升(μg/mL);

C-最终试样液所代表的试样的浓度,单位为克每毫升(g/mL)。

注:计算结果需扣除空白值。

 
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